實驗室液相色譜儀的計量校準是一個涉及多個方面的過程，以下是詳細的步驟和注意事項：

　　一、環(huán)境條件

　　在進行液相色譜儀的計量校準前，應(yīng)確保環(huán)境條件符合以下要求：

　　室溫應(yīng)保持在（15~30）℃，校準過程中溫度變化不超過3℃（對于差示折射率檢測器，室溫變化不超過2℃）。

　　室內(nèi)相對濕度應(yīng)保持在（20~85）%。

　　房間內(nèi)不得存放易燃、易爆、強腐蝕性物品。

　　無明顯的機械振動和電磁干擾，且通風(fēng)良好。

　　二、標準物質(zhì)和校準設(shè)備

　　應(yīng)使用國家有證標準物質(zhì)，并確保校準設(shè)備經(jīng)過計量檢定合格。常用的標準物質(zhì)包括：

　　萘-甲醇溶液標準物質(zhì)，定值為1.00×10^-4g/mL，擴展不確定度小于4%。

　　膽固醇甲醇溶液標準物質(zhì)，標準值為200μg/mL，擴展不確定度小于2.0%。

　　其他根據(jù)具體校準需求選擇的標準物質(zhì)。

　　校準設(shè)備可能包括移液器、容量瓶、溫度計等。
 

　　三、校準步驟

　　1.輸液系統(tǒng)校準

　　泵的耐壓性：連接好儀器各部分，以甲醇（或純水）為流動相，流速設(shè)為0.2mL/min。啟動儀器并保持壓力穩(wěn)定10分鐘，檢查各管道接口處是否有泄漏。取下色譜柱，堵塞泵出口端，使壓力達到最大允許值的90%，保持5分鐘，確認無泄漏。

　　泵流量設(shè)定誤差及流量穩(wěn)定性：按要求設(shè)定流速，啟動儀器并待壓力穩(wěn)定后，用清潔容量瓶在流動相出口處收集流動相，計時并稱重，計算所測流速。重復(fù)校準3次以確保準確性。

　　梯度誤差：設(shè)置梯度洗脫程序，用溶劑A（如水）和溶劑B（如含0.1%丙酮的水溶液）進行梯度變化曲線的繪制和計算。

　　2.柱箱溫度設(shè)定點誤差和穩(wěn)定性校正

　　將數(shù)字溫度計探頭置于色譜柱恒溫器中與色譜柱相同的位置。

　　選擇設(shè)定溫度（如35℃和45℃），待溫度穩(wěn)定后記錄讀數(shù)，并每10分鐘記錄一次，共7次。

　　計算平均值與設(shè)定值間的差值作為柱溫設(shè)定值的誤差，7個讀數(shù)中的極大值與最小值之差作為柱溫穩(wěn)定性。

　　3.探測器標定

　　以紫外可見光探測器和二極管陣列探測器為例，連接好儀器各部分，選用合適的色譜柱和流動相。

　　設(shè)置相應(yīng)的測量參數(shù)，如波長、靈敏度等。

　　基線穩(wěn)定后注入一定體積的標準物質(zhì)溶液（如1.0×10^-4g/mL的萘-甲醇溶液），連續(xù)測定并記錄色譜峰的保留時間和峰面積。

　　4.進樣體積準確性校準（如適用）

　　可采用標準品校準法、稱重法、定量環(huán)校準法或與標準進樣器對比法等方法進行。

　　標準品校準法：使用已知濃度的標準品溶液多次進樣，記錄色譜峰響應(yīng)值并計算進樣體積的準確性。

　　稱重法：通過稱重計算實際吸取的溶劑體積并與設(shè)定體積進行對比。

　　定量環(huán)校準法：檢查定量環(huán)的體積準確性，通過觀察色譜峰形狀和響應(yīng)值來判斷。

　　與標準進樣器對比法：使用標準進樣器進行對比分析，計算進樣體積的偏差并進行調(diào)整。

　　四、校準記錄和報告

　　在校準過程中應(yīng)詳細記錄各項數(shù)據(jù)和觀察結(jié)果。

　　校準完成后應(yīng)編寫校準報告，包括校準日期、環(huán)境條件、校準設(shè)備、校準步驟、數(shù)據(jù)記錄和分析結(jié)果等內(nèi)容。

　　校準報告應(yīng)由專業(yè)人員審核并簽字確認。

　　五、注意事項

　　校準過程中應(yīng)嚴格遵守操作規(guī)程和安全規(guī)范。

　　使用標準物質(zhì)時應(yīng)確保其有效期內(nèi)并妥善保存。

　　校準設(shè)備應(yīng)定期維護和檢定以確保其準確性。

　　實驗室液相色譜儀的計量校準是一個復(fù)雜而精細的過程，需要專業(yè)人員嚴格按照操作規(guī)程進行以確保儀器的準確性和可靠性。